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  2012-09-26 16:34:57   9274
  관리자

 ① 표준한천배지(균수측정용):Standard Methods Agar(Plate Count Agar)
        Tryptone  5.0g
        Yeast Extract   2.5g
        Dextrose  1.0g
       Agar  15.0g
     위의 성분에 증류수를 가하여 1,000ml로 만들고 멸균한 후 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121°로 15분간 멸균한다.

② 유당배지(Lactose Broth)
        Peptone 5.0g
        Beef Extract  3.0g
        Lactose  5.0g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

 

 ③ BGLB배지(Brilliant Green Lactose Bile Broth)
      펩톤 10g 및 유당 10g을 증류수 500ml에 녹인다.
      신선한 우담즙 200ml(또는 건조 우담즙말 20g)을 증류수 200ml에 녹인 것으로서 pH 7.2±0.2가 되도록 한 것을 가한다.
      이에 물을 가하여 전량이 약 975ml가 되도록 하고 pH 7.4로 조정한다.
      0.1% Brilliant Green 수용액 13.3ml를 가한다.
      전량 1,000ml를 탈지면으로 여과하여 분주할 때 발효관에 넣고 상법에 따라 멸균한다(멸균후의 pH 7.2±0.1).

 ④ 두배농도 BGLB배지
       펩톤 10g 및 유당 10g을 증류수 250ml에 녹이고 이에 신선한 우담즙 200ml 또는 건조 우담즙분말 20g을 증류수 200ml에 녹인 것으로서 pH 7.2±0.2의 것을 가하여 약 480ml로 하여 pH 7.4로 조정하고 여기에 0.2% brilliant green 수용액 13.3ml를 가하여 전량을 500ml로 하고 탈지면으로 여과하여 발효관에 약 10ml씩 분주한 후 멸균한다(멸균후의 pH 7.1∼7.4로 한다).

 ⑤ Endo 한천배지(Endo Agar)
        Dipotassium Phosphate(K2HPO4)  3.5g
        Peptone  10.0g
        Lactose  10.0g
        Sodium Sulfite   2.5g
        Basic Fuchsin   0.5g
        Agar  15.0g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.4±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

 ⑥ EMB 한천배지(Eosine Methylene Blue Agar)
        Peptone    10.0g
        Lactose  5.0g
        Sucrose   5.0g
        Dipotassium Phosphate 2.0g
        Eosin Y  0.4g
        Methylene  Blue 0.065g
       Agar  13.5g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

 ⑦ 보통배지(Nutrient Broth)
        Peptone  5.0g
        Beef Extract 3.0g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.0∼7.4로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

 ⑧ 보통한천배지(Nutrient Agar)
       보통배지 1,000ml에 정제한천 15g을 가하여 가열 용해하고 증류수량을 보정한다. pH 6.8±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

 ⑨ 데스옥시콜레이트유당한천배지(Desoxycholate Lactose Agar)
        Peptone 10.0g
        Lactose  10.0g
        Sodium Chloride 5.0g
        Sodium Citrate  2.0g
        Sodium Desoxycholate  0.5g
        Agar  15.0g
        Neutral Red  0.03g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.3∼7.5로 조정한 후 1분간 끓여서 용해시켜 멸균하지 않고 즉시 사용할 수 있다(고압증기멸균하면 배지의 pH가 떨어져 데스옥시콜산나트륨이 침전할 수 있으므로 피하는 것이 좋다).

        EC 배지(EC Broth)
          Peptone  20.0g
          Lactose  5.0g
          Bile Salt Mixture  1.5g
          Dipotassium Phosphate  4.0g
          Monopotassium Phosphate  1.5g
          Sodium Chloride  5.0g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정하여 시험관에 분주하여 발효관을 넣은 후 121°에서 15분간 멸균한다.

        BCP첨가 평판측정용 한천배지(Plate Count Agar with Brom Cresol Purple)
          Yeast Extract  2.5g
          Peptone  5.0g
          Dextrose 1.0g
          Tween 80  1.0g
          L Cysteine  0.1g
         Agar  15.0g
      위의 성분(다만, 종균에 따라 적정 peptone을 사용하여야 함)을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.8∼7.0으로 조정한 후 BCP(Brom cresol purple)을 0.004∼0.006%가 되도록 가하고 121°에 서  15분간 멸균한다.

       포테이토덱스트로즈 한천배지(Potato Dextrose Agar)
          Potato, Infusion from  200.0g
          Dextrose 20.0g
          Agar  15.0g
       위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정하고 121°에서 15분간 멸균하여 식힌 후 멸균된 10% 주석산을 무균적으로 가하여 pH를 3.5±0.1로 맞춘다.

       티오글리콜린산염배지(Fluid Thioglycollate Medium)
          Yeast Extract  5.0g
          Casitone 15.0g
          Dextrose  5.0g
          Sodium Chloride 2.5g
          L Cystine  0.75g
          Thioglycollic Acid  0.5g
          Agar  0.75g
          Resazurin  0.001g
       위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH를 7.1±0.2로 조정하고 121°에서 15분간 멸균한 후 찬물에 급냉하여 레자즈린층이 나타나게 한다.
      

       난황첨가 만니톨 식염한천배지(Mannitol Salt Agar with Egg Yolk Agar)
          Beef Extract  2.5g
          Peptone  10g
          Mannitol  10g
          Sodium Chloride  75g
          Phenol Red  25mg
          Agar  15g
      위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 가열 용해한 후 pH 7.2∼7.6으로 조정한 후 121°에 서  15분간 멸균한다.
      멸균시킨 배지를 50°정도로 식혀 난황액(난황에 동량의 멸균생리식염수를 가한 것)을 10%의 비율로 무균적으로 가해 잘 혼합한 후 사용한다.
      

       BL 한천배지(BL Agar)
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균하여, 50°로 냉각시킨 후 소, 말, 양 또는 사람의 탈섬유소 혈액을 5% 되도록 첨가한다.

      펩톤수(Alkaline Peptone Water:2% NaCl을 가한 것)
         Peptone  10g
         Sodium Chloride  20g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 8.6(당을 포함한 제품의 경우에는 pH 9.2)으로 조정한 후 10ml씩 분주하여 121°에서 15분간 멸균한다.
      

      TCBS 한천배지(Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar)
          Yeast Extract   5g
          Peptone  10g
          Sodium Citrate  10g
          Sodium Thiosulfate  10g
          OXgall  5g
          Sodium Cholate 3g
          Sucrose  20g
          Sodium Chloride  10g
          Ferrous Citrate 1g
          Brom Thymol Blue  0.04g
          Thymol Blue  0.04g
          Agar  15g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 가열한 후 50°정도로 식혀 멸균페트리접시에 붓는다. 최적 pH는 8.6이며 고압증기멸균을 해서는 안된다.
      

     LIM 반유동배지
          Peptone  10g
          Yeast Extract  3g
          Dextrose 3g
          Brom Cresol Purple 0.02g
          L Lysin Hydrochloride 10g
          L Tryptophan  0.5g
          Agar 3g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.7로 조정한 후 시험관에 분주하여 121°에서 15분간 멸균하여 사용한다.

       VP반유동배지
          Yeast Extract 1g
          Casein peptone 7g
          Soypeptone 5g
          Dextrose  10g
          NaCl  5g
         Agar 3g
        위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹인 후 pH 7.0∼7.2로 조정한 후 시험관에 분주하여  121°에서 15분간 멸균한다.

       Purple Broth Base
          Proteose Peptone 10g
          Beef Extract 1g
          Sodium Chloride 5g
          Brom Cresol Purple  0.015g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후  121°에서 15분간 멸균한다.

       Moeller Basal Broth
          Peptone 5g
          Beef Extract 5g
          Dextrose  0.5g
          Brom Cresol Purple  0.01g
          Cresol Red  0.005g
          Pyridoxal Hydrochloride  0.005g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.0으로 조정한 후 시험관에 분주하여 121° 에서 15분간 멸균한다. 균을 접종 후 멸균 유동파라핀을 중층한다.

       ONPG (O-nitrophenyl-β-D-galacto-pyranoside) broth
         0.5% NaCl을 가한 Peptone수 75ml에 ONPG 용액 25ml를 첨가한다. 시험관에 ONPG Broth 2.5ml씩 분주한다.
       * ONPG용액:ONPG 6g을 0.01M 인산수소이나트륨 1,000ml에 용해하여 pH를 7.5로 조정한다.

       TSB 배지(Tryptic Soy Broth)
          Tryptone  17g
          Soytone 3g
          Dextrose  2.5g
          Sodium Chloride 5g
          Dipotassium Phosphate  2.5g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       3% Ogawa 배지(3% KH2PO4)
         Monopotassium Phosphate  3g
         Sodium Glutamate  1g
         위의 성분을 증류수 100ml에 녹여 100°에서 30분간 끓인다. 이 기초액에 전란액(全卵液) 200ml, Glycerin 6ml, 2% Malachite Green 수용액 6ml씩 취하여 충분히 혼합한 후 5∼6ml씩 멸균시험관 또는 U.C 병에 분주한 다음 85∼90°에서 60분간 가열한다.

       BS 한천배지(Bifidobacterium selective Agar)
          Sodium Propionate  15g
          Paromomycin Sulfate  50mg
          Neomycin  100mg
          Lithium Chloride 3g
         BL한천배지(배지 15) 1,000ml에 위의 성분을 첨가하여 조제한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       Liver Agar
          Beef Liver, infusion from 500g
          Proteose Peptone 10g
          Sodium Chloride 5g
          Agar  20g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹인 후 121°에서 15분간 멸균한다.
 

      클로스트리디움퍼프린젠스 한천배지(Clostridium perfringens Agar)
          Heart Infusion  5g
          Casein Peptone  10g
          Proteose Peptone  10g
          Sodium Chloride  5g
          Lactose  10g
          Phenol Red 50mg
          Agar  20g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.5∼7.7로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균 후 배지를 50°정도로 식혀 난황액(난황에 동량의 멸균생리식염수를 가한 것)을 10% 가 되도록 첨가한다.
 

      Selenite F Broth
          Polypeptone  5.0g
          Lactose 4.0g
          Disodium Phosphate 10.0g
          Sodium Selenite 4.0g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 100°에서 30분간 끓인다.
 

      SS 한천배지(Salmonella Shigella Agar)
          Beef Extract 5.0g
          Proteose Peptone 5.0g
          Lactose  10.0g
          Bile Salt No.3 8.5g
          Sodium Citrate 8.5g
          Sodium Thiosulfate 8.5g
          Ferric Citrate 1.0g
          Agar  13.5g
          Brilliant Green  0.0033g
          Neutral Red  0.025g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 100°로 끓여 완전용해한다.

       MacConkey Agar
          Peptone  17.0g
          Polypeptone 3.0g
          Lactose  10.0g
          Bile Salts No.3  1.5g
          Sodium Chloride 5.0g
          Neutral Red  0.03g
          Crystal Violet  0.001g
          Agar  13.5g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.1±0.2로 조정하고 가열 용해한 후  121°에서 15분간 멸균한다.

       Desoxycholate Citrate Agar
          Beef Extract 5.0g
          Peptone 5.0g
          Lactose  10.0g
          Sodium Citrate 8.5g
          Sodium Thiosulfate 5.4g
          Ferric Ammonium Citrate 1.0g
          Sodium Desoxycholate 5.0g
          Neutral Red  0.02g
          Agar 12.0g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.5±0.2로 조정한 후 끓인다.

       TSI 한천배지(Triple Sugar Iron Agar)
          Beef Extract  3.0g
          Yeast Extract 3.0g
          Peptone  20.0g
          Lactose  10.0g
          Sucrose  10.0g
          Dextrose   1.0g
          Ferrous Sulfate  0.2g
          Sodium Chloride  5.0g
          Sodium Thiosulfate 0.3g
          Phenol Red  0.24g
          Agar  13.0g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.4±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       Cooked Meat Medium
          Beef Heart  500g
          Peptone  10g
          Glucose   2g
          Sodium Chloride   5g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       GAM 당분해용 반유동 배지
          Peptone  10g
          Soytone   3g
          Proteose Peptone  10g
          Bovin Serum Albumin 13.5g
          Yeast Extract  5g
          Beef  2.2g
          Potassium Phosphate, Monobasic   2.5g
          Liver   1.2g
          Sodium Chloride     3g
          L Cystein   0.3g
          Sodium Thioglychollate   0.3g
          Agar  1.5g
          Sugar    10g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 가온용해 후 당을 가해서 작은 시험관에 분주하여 110∼115°에서 15분간 멸균 후 급냉시킨다.

       Listeria Enrichment Broth
          Tryptone  17g
          Soytone  3g
          Glucose  2.5g
          Sodium Chloride  5g
          Potassium Phosphate, Dibasic  2.5g
          Yeast Extract  6g
          Cycloheximide  0.05g
          Acriflavin HCl  0.015g
          Nalidixic Acid  0.04g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       UVM Modified Listeria Enrichment Broth
          Tryptose  10g
          Beef Extract  5g
          Yeast Extract  5g
          Sodium Chloride  20g
          Sodium Phosphate, Dibasic  9.6g
          Potassium Phosphate, Monobasic  1.35g
          Esculin  1g
          Nalidixic Acid  0.02g
          Acriflavin HCl  0.012g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       Fraser Listeria Broth
          Tryptose  10g
          Beef Extract  5g
          Yeast Extract  5g
          Sodium Chloride  20g
          Sodium Phosphate, Dibasic  9.6g
          Potassium Phosphate, Monobasic  1.35g
          Esculin  1g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 121°에서 15분간 멸균하여 50°로 식힌 후 Nalidixic Acid 0.02g, Acriflavin HCl 0.021g, Lithium Chloride 3g을 여과멸균하여 가한다.

       Oxford Agar
          Columbia Blood Agar Base  39g
          Esculin  1g
          Ferric Ammonium Citrate  0.5g
          Lithium Chloride  15g
          Agar  2g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다. 이를 50°정도로 식힌 후 Cycloheximide 400mg, Colistin Sulfate 20mg, Acriflavin 5mg, Cefotetan 2mg, Fosfomycin 10mg을 여과멸균하여 가한다.

       LPM 한천배지(Lithium Chloride Phenylethanol Moxalactam Agar)
          Thyptose  10g
          Beef Extract  3g
          Sodium Chloride  5g
          Lithium Chloride  5g
          Glycine Anhydride  10g
          Phenylethanol  2.5g
          Agar  15g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다. 이를 50°정도로 식힌 후 Moxalactam 20mg을 여과멸균하여 가한다.

       Tryptic Soy Agar
          Tryptose  17g
          Soytone  3g
          Glucose  2.5g
          Sodium Chloride  5g
          Dipotassium Phosphate  2.5g
          Agar  15g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       TSC 한천배지(Tryptose Sulfite Cycloserine Agar)
          Tryptose  15g
          Yeast Extract  5g
          Soytone  5g
          Ferric Ammonium Citrate  1g
          Sodium Metabisulfite  1g
          Agar  20g
         위의 성분에 증류수 900ml를 가하여 녹인 후 pH를 7.6±0.2로 조정한다. 이를 500ml Flask에 250ml씩 분주한 후 121°에서 15분간 멸균한다. 이 배지를 50℃에 보관한다.
         D cycloserine solution D cycloserine 1g을 200ml의 증류수로 용해한 후 여과멸균하고 사용할 때까지 4°로 보관한다.
         Final medium 250ml base에 D cycloserine 용액 20ml를 넣은 후 " 클로스트리디움 퍼프린젠스한천배지"와 같은 방법으로 난황액을 넣고 분주한다.

       mEC 배지
          Tryptone  20g
          Bile Salt No.3  1.12g
          Lactose  5.0g
          Dipotassium Phosphate  4.0g
          Monopotassium Phosphate  1.5g
          Sodium Chloride  5g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균하여 식히고, 여과멸균한 novobiocin sodium salt 용액(0.02g/l)을 첨가한다.

       MacConkey Sorbitol 한천배지
          Peptone  15.5g
          Proteose Peptone  3g
          d Sorbitol  10g
          Bile Salts  1.5g
          Sodium Chloride  5g
          Agar  15g
          Neutral Red  0.03g
          Crystal Violet  0.001g
        위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹인 후 pH 7.1로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

       PSBB 배지(Peptone Sorbitol Bile Broth)
 Disodium Phosphate  8.23g
 Monosodium Phosphate  1.2g
 Bile Salts No.3  1.5g
 Sodium Chloride  5g
 d Sorbitol  10g
 Peptone  5g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹인 후 pH 7.6으로 조정하고 121°에서 15분간 멸균하여 사용한다.

       CIN 한천배지(Cefsulodin Irgasan Novobiocin Agar)
          Peptone  20g
          Yeast Extract  2g
          Mannitol  20g
          Sodium Pyruvate  2g
          Sodium Chloride 1g
          Magnesium Sulfate 7H2O(10mg/ml)  1ml
          Agar  12g
         위의 성분을 750ml의 증류수에 녹여 충분히 끓인 후 80°로 식히고 95% ethanol에 녹인 0.4% Irgasan을 1ml 넣어 완전히 섞는다. 다음으로 200ml의 데스옥시콜레이트 용액(증류수 200ml에 sodium desoxycholate 0.5g을 녹인 것)에 neutral red 10ml(3mg/ml), crystal violet 10ml(0.1mg/ml), cefsulodin 10ml(1.5mg/ml), novobiocin 10ml(0.25mg/ml)를 가하여 준다. 천천히 흔들면서 10% strontium chloride 10ml를 넣는다. 1N NaOH로 pH 7.4로 맞춘 후 분주하여 사용한다. 이 때 멸균후 첨가하는 모든 시약은 제균하여 사용한다.

       MYP 한천배지(Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar)
          Beef Extract  1g
          Peptone  10g
          Mannitol  10g
          Sodium Chloride  10g
          Phenol Red  0.025g
          Agar  15g
         위의 성분을 900ml의 증류수에 녹이고 pH 7.2로 조정한 후 500ml flask에 225ml씩 분주 멸균하여 50°로 식힌다. 225ml의 배지에 polymyxin B 용액(10,000unit/ml) 2.5ml와 50% 난황액 12.5ml를 넣어 혼합 후 분주한다.

           50% 난황액 조제 방법
            계란을 1시간 가량 0.1% HgCl2에 담근 후 꺼내 70% ethanol에 30분 가량 담궈 놓는다. 계란을 꺼내 노른자만 취한 후 동량의 0.85% 식염수를 가하여 사용한다.

       HUNT 배지
          Beef Extract Powder  10g
          Peptone  10g
          Sodium Chloride  5g
          Yeast Extract  6g
        위의 성분을 증류수 950ml에 녹인 후 pH 7.5로 조정하고 121°에서 15분간 멸균하여 식히고 용혈시킨 말 혈액 50ml, 항생제 혼합액 1 또는 항생제 혼합액 2를 16ml 가하고, FBP용액 4ml를 혼합한다.
           항생제 혼합액 1
            Sodium Cefoperazone(0.8g/100ml), Trimethoprim Lactate(0.375g/100ml), Vancomycin
            (0.25g/100ml), Amphotericin B(0.05g/100ml)용액 각 4ml씩을 혼합한다.
  

         항생제 혼합액 2
            Sodium Cefoperazone(0.8g/100ml), Trimethoprim Lactate(0.375g/100ml), Vancomycin
            (0.25g/100ml), Rifampicin(0.125g/100ml)용액 각 4ml씩을 혼합한다.

           FBP용액:ferrous sulfate, sodium metabisulfite, sodium pyruvate 6.25g씩을 증류수 100ml에 녹인다.

       Modified Campy blood free 한천배지
          CCDA agar base(Oxoid)  45.5g
          Yeast Extract  2g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.4로 맞춘 후 121°에서 15분간 멸균하여 식히고, sodium cefoperazone 용액(0.8g/100ml) 4ml, rifampicin용액(0.125g/100ml) 4ml, amphotericin B 용액(0.05g/100ml) 4ml를 첨가한다.

       Abeyta Hunt blood 한천배지
          Heart infusion broth  25g
          Agar  15g
          Yeast Extract  2g
         위의 성분을 증류수 950ml에 녹여 pH 7.4로 맞춘 후 121°에서 15분간 멸균하여 식히고, sodium cefoperazone 용액(0.8g/100ml) 4ml, rifampicin 용액(0.125g/100ml) 4ml, amphotericin B 용액(0.05g/100ml) 4ml, 용혈시킨 말 혈액 50ml를 첨가한다.

       TPGY배지
          Trypticase  50g
          Peptone  5g
          Yeast Extract  20g
          Dextrose  4g
          Sodium Thioglycollate  1g
         위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹인 후 pH 7.0으로 조정하고, 15ml씩 시험관에 분주하여 121°에서 10분간 멸균한 후 냉장보관한다.

       Liver Veal 난황한천배지
           Liver Veal Agar(Difco)  48.5g
         Liver Veal Agar를 증류수 500ml에 녹여 121°에서 15분간 멸균한 후, 50°정도로 식혀 난황액(난황에 동량의 멸균생리식염수를 가한 것) 40ml를 무균적으로 가하고 평판을 만든다.

       혐기성 난황 한천배지
          Yeast Extract  5g
          Tryptone  5g
          Proteose Peptone  20g
          Sodium Chloride  5g
          Agar  20g
       위의 성분을 증류수 1,000ml에 녹여 pH 7.0으로 조정하고, 121°에서 15분간 멸균한 후 50°정도로 식혀 난황액(난황에 동량의 멸균생리식염수를 가한 것) 40ml를 무균적으로 가하고 평판을 만든다.
   

 (3) 시액
      ① 멸균인산완충희석액
         인산2수소칼륨(KH2PO4) 34g을 증류수 500ml에 용해하고 1N 수산화나트륨 175ml를 가해 pH를 7.2로 조정하고 여기에 증류수를 가하여 1,000ml로 하여 인산완충액으로 한다. 이것을 121℃에서 20분간 멸균한 다음 냉장고에 보존한다. 사용시에는 이 원액 1ml를 취하여 멸균증류수 800ml에 가하여 희석하고 이것을 멸균인산완충희석액으로 한다.
      ② 멸균생리식염수
         Sodium Chloride 8.5g에 증류수를 가하여 1,000ml로 하고 15파운드(121℃)로 15분간 고압증기멸균한다.
      ③ 뉴 만 염색액
         테트라클로로에탄(Tetrachloroethane) 40ml와 에탄올(Ethanol)을 삼각플라스크에 취하고 70°까지 가온한 후 여기에 메틸렌블루(Methylen blue) 1.0∼2.0g을 가하여 세게 진탕 혼합하여 색소를 용해시킨 다음 냉각시킨다. 여기에 빙초산 6ml를 천천히 가한 후 여과시켜 냉암소에 밀봉 저장한다. 염색액을 조제하여 시일이 경과한 것이나 또는 침전물이 생성된 것은 사용해서는 안된다.
        BTB MR 지시약
         Brom Thymol Blue 0.2g과 Methyl Red 0.1g을 95% 에탄올 300ml에 용해한 후 정제수 200ml와 혼합한다.
      ④ 젤라틴 인산완충액
         Gelatin 2g과 Disodium Phosphate 4g을 증류수 1,000ml에 녹여 pH를 6.2로 조정한 후 121°에서 15분간 멸균한다.

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